ELISA試劑盒(he)常(chang)見保溫(wen)詳情

    在(zai)ELISA試劑盒(he)中壹(yi)般(ban)有兩(liang)次(ci)抗原抗(kang)體(ti)反應(ying)，即(ji)加標(biao)本(ben)和加酶(mei)結(jie)合(he)物後。抗(kang)原抗(kang)體(ti)反應(ying)的(de)完(wan)成(cheng)需要有壹(yi)定的(de)溫(wen)度(du)和時間，這(zhe)壹(yi)保溫(wen)過程稱(cheng)為(wei)溫(wen)育，有人稱之(zhi)為(wei)孵育(yu)，在(zai)ELISA試劑盒(he)中似不恰(qia)當(dang)。

      ELISA試劑盒(he)屬固相免疫測定，抗(kang)原、抗(kang)體(ti)的(de)結(jie)合(he)只在(zai)固相表面(mian)上(shang)發(fa)生(sheng)。以抗體包被的(de)夾(jia)心法(fa)為(wei)例(li)，加(jia)入(ru)板(ban)孔中的(de)標(biao)本(ben)，其中的(de)抗(kang)原並不(bu)是(shi)都(dou)有均等的(de)和(he)固相抗結合(he)的(de)機會(hui)，只有近孔壁(bi)的(de)壹(yi)層溶液中的(de)抗(kang)原直(zhi)接與(yu)抗(kang)體接觸(chu)。這(zhe)是(shi)壹(yi)個(ge)逐(zhu)步(bu)平(ping)衡的(de)過程，因(yin)此(ci)需經擴(kuo)散(san)才(cai)能達到(dao)反應(ying)的(de)終點。在(zai)其(qi)後加(jia)入(ru)的(de)酶(mei)標(biao)記(ji)抗(kang)體與(yu)固相抗原的(de)結(jie)合(he)也同(tong)樣(yang)如(ru)此。這(zhe)就是(shi)為(wei)什麽(me)ELISA反應(ying)總是(shi)需(xu)要壹(yi)定時間的(de)溫(wen)育。

       溫(wen)育常(chang)采用(yong)的(de)溫(wen)度(du)有43℃、37℃、室(shi)溫(wen)和4℃等(deng)。37℃是(shi)實(shi)驗室(shi)中常(chang)用(yong)的(de)保(bao)溫(wen)溫(wen)度(du)，也是(shi)大(da)多(duo)數(shu)抗(kang)原抗(kang)體(ti)結合(he)的(de)合(he)適(shi)溫(wen)度(du)。在(zai)建(jian)立ELISA方(fang)法(fa)作(zuo)反應(ying)動(dong)力學(xue)研(yan)究時，實(shi)驗表(biao)明，兩(liang)次(ci)抗原抗(kang)體(ti)反應(ying)壹(yi)般(ban)在(zai)37℃經(jing)1～2小(xiao)時，產物的(de)生(sheng)成(cheng)可達。為(wei)加速(su)反應(ying)，可提(ti)高(gao)反應(ying)的(de)溫(wen)度(du)，有些(xie)試驗在(zai)43℃進(jin)行(xing)，但(dan)不(bu)宜采用(yong)更(geng)高(gao)的(de)溫(wen)度(du)。抗原抗(kang)體(ti)反應(ying)4℃更(geng)為(wei)*，在(zai)放(fang)射(she)免(mian)疫測定中多(duo)使反應(ying)在(zai)冰(bing)箱(xiang)中過夜，以形成(cheng)zui多(duo)的(de)沈(chen)澱。但(dan)因所需時間太長，在(zai)ELISA試劑盒(he)中壹(yi)般(ban)不(bu)予(yu)采用(yong)。

      保(bao)溫(wen)的(de)方(fang)式(shi)除(chu)有的(de)ELISA試劑盒(he)儀器附有特(te)制的(de)電(dian)熱塊外(wai)，壹(yi)般(ban)均采用(yong)水浴，可將ELISA試劑盒(he)板置於水浴箱中，ELISA試劑盒(he)板底應貼(tie)著(zhe)水面(mian)，使溫(wen)度(du)迅速(su)平(ping)衡。為(wei)避免(mian)蒸(zheng)發(fa)，板(ban)上(shang)應(ying)加(jia)蓋(gai)，也可用(yong)塑料貼封紙(zhi)或(huo)保鮮(xian)膜覆蓋(gai)板孔，此(ci)時可讓(rang)反應(ying)板(ban)漂(piao)浮(fu)在(zai)水面(mian)上(shang)。若用(yong)保(bao)溫(wen)箱，ELISA試劑盒(he)應放在(zai)濕(shi)盒(he)內，濕(shi)盒(he)要選用(yong)傳(chuan)熱(re)性良好(hao)的(de)材(cai)料如(ru)金(jin)屬等，在(zai)盒(he)底墊(dian)濕的(de)紗(sha)布(bu)，將ELISA試劑盒(he)板放在(zai)濕(shi)紗(sha)布(bu)上(shang)。濕(shi)盒(he)應先放在(zai)保(bao)溫(wen)箱中預溫(wen)至規定的(de)溫(wen)度(du)，特(te)別是(shi)在(zai)氣溫(wen)較低(di)的(de)時候更(geng)應(ying)如(ru)此。無論(lun)是(shi)水浴還是(shi)濕(shi)盒(he)溫(wen)育，反應(ying)板(ban)均不宜疊(die)放(fang)，以保證各板的(de)溫(wen)度(du)都(dou)能迅速(su)平(ping)衡。室(shi)溫(wen)溫(wen)育的(de)反應(ying)，操(cao)作(zuo)時的(de)室(shi)溫(wen)應嚴格限(xian)制(zhi)在(zai)規(gui)定(ding)的(de)範(fan)圍(wei)內，標(biao)準室溫(wen)溫(wen)度(du)是(shi)指(zhi)20～25℃，但(dan)具(ju)體操(cao)作(zuo)時可根據說明書(shu)的(de)要求(qiu)控(kong)制(zhi)溫(wen)育。室(shi)溫(wen)溫(wen)育時，ELISA試劑盒(he)只要平(ping)置於(yu)操作(zuo)臺上(shang)即(ji)可。應(ying)註(zhu)意(yi)溫(wen)育的(de)溫(wen)度(du)和時間應(ying)按(an)規定力(li)求(qiu)準確。為(wei)保證這(zhe)壹(yi)點，壹(yi)個(ge)人操作(zuo)時，壹(yi)次不宜多(duo)於兩(liang)塊板同時測定(ding)。