細胞培養(yang)過(guo)程(cheng)中(zhong)汙染(ran)類(lei)型分(fen)析(xi)

細(xi)胞培養(yang)是指(zhi)將(jiang)細(xi)胞從動(dong)物或植物體內取出(chu)，然(ran)後(hou)在適(shi)宜的(de)人(ren)工(gong)環(huan)境中(zhong)生(sheng)長(chang)的過(guo)程(cheng)。細胞可(ke)以在培養(yang)前直(zhi)接從組(zu)織中(zhong)取出(chu)並(bing)通過(guo)酶或機械(xie)方法(fa)進行(xing)解離，也(ye)可(ke)以來源(yuan)於已(yi)建立(li)的細(xi)胞系或細胞株(zhu)。細(xi)胞常(chang)規(gui)培養是在(zai)細(xi)胞房中(zhong)進行(xing)，在(zai)超(chao)凈(jing)工(gong)作臺(tai)或生(sheng)物安全(quan)櫃(gui)中(zhong)，把(ba)細胞處理(li)好(hao)，根(gen)據(ju)需(xu)要(yao)加入細胞培養(yang)基(ji)，放入細胞培養(yang)瓶/皿(min)或細胞培養(yang)板中(zhong)，再放到(dao)帶(dai)有(you)5% CO2 的(de)37℃恒溫培(pei)養箱中(zhong)培養(yang)。細(xi)胞培養(yang)過(guo)程(cheng)中(zhong)如果(guo)操(cao)作(zuo)不(bu)當(dang)或者(zhe)條件控制不(bu)合(he)適(shi)容易受到(dao)化學或者(zhe)生(sheng)物因素(su)的(de)汙(wu)染(ran)，常(chang)見(jian)的汙染(ran)源(yuan)有(you)：
 

    1.細(xi)菌汙(wu)染(ran) 

    細(xi)菌汙(wu)染(ran)是實(shi)驗(yan)室細胞培養(yang)中(zhong)常(chang)見(jian)的汙染(ran)，即使在(zai)細(xi)胞培養(yang)液(ye)中(zhong)加入了(le)抗菌素(su)，也(ye)可(ke)能(neng)因為(wei)操作(zuo)不(bu)慎(shen)而(er)引(yin)起汙染(ran)。常(chang)見(jian)的有(you)革(ge)蘭氏陽(yang)性菌，如(ru)枯(ku)草(cao)桿(gan)菌以及大腸(chang)桿菌、假(jia)單(dan)胞菌等(deng)革蘭氏陰(yin)性(xing)菌，其(qi)中(zhong)又(you)以白色(se)葡萄球(qiu)菌較(jiao)常(chang)見(jian)。 

    培養細胞受細(xi)菌汙(wu)染(ran)後(hou)，會出現(xian)培(pei)養液(ye)變(bian)混濁，pH改變(bian)。汙染(ran)後(hou)細(xi)胞發(fa)生(sheng)病理(li)改變(bian)，胞內顆粒(li)增(zeng)多、增(zeng)粗(cu)，後(hou)變(bian)圓脫(tuo)落死亡(wang)。 

    2.真菌汙(wu)染(ran) 

    真菌汙(wu)染(ran)是細(xi)胞培養(yang)過(guo)程(cheng)中(zhong)常(chang)見(jian)的壹(yi)種，常(chang)見(jian)的真菌有(you)煙(yan)曲(qu)黴(mei)、黑(hei)曲(qu)菌、孔子(zi)黴(mei)、毛(mao)黴(mei)菌、白(bai)色(se)念珠(zhu)菌和(he)酵母菌。 

    培(pei)養細胞受真菌汙(wu)染(ran)後(hou)，可(ke)見(jian)培養液(ye)中(zhong)漂(piao)浮著(zhe)白(bai)色(se)或淺黃色(se)的小(xiao)點，有(you)的(de)散在生(sheng)長(chang)，培養液(ye)壹(yi)般(ban)不(bu)發(fa)生(sheng)混(hun)濁；倒置(zhi)顯微鏡(jing)下(xia)可(ke)見(jian)絲狀(zhuang)、管(guan)狀(zhuang)或樹枝狀(zhuang)的菌絲(si)縱橫交(jiao)錯(cuo)在(zai)細(xi)胞之(zhi)間(jian)或培養(yang)基(ji)中(zhong)，有(you)的(de)呈(cheng)鏈(lian)狀(zhuang)排(pai)列(lie)。 

   真菌汙(wu)染(ran)後(hou)，細(xi)胞生(sheng)長(chang)變慢(man)，但(dan)後由於營(ying)養耗(hao)盡及毒(du)性作用(yong)而(er)使細(xi)胞脫落死亡(wang)。 

    3.支(zhi)原(yuan)體(ti)汙(wu)染(ran) 

    支(zhi)原(yuan)體(ti)是介於細(xi)菌與(yu)病毒(du)之(zhi)間(jian)能獨立(li)生(sheng)活(huo)的小微生(sheng)物，小直(zhi)徑(jing)0.2μm，壹(yi)般(ban)過(guo)濾(lv)除(chu)菌無(wu)法(fa)去(qu)除(chu)它(ta)，光鏡(jing)下(xia)難(nan)以看清(qing)它(ta)的形態結(jie)構。開始不(bu)易(yi)發(fa)現(xian)，能在(zai)偏堿條件下生(sheng)存(cun)，對(dui)青(qing)黴(mei)素(su)有(you)抗藥性。多吸(xi)附於細(xi)胞表面(mian)或散在(zai)於細(xi)胞之(zhi)間(jian)。 

    培養細(xi)胞受支(zhi)原(yuan)體(ti)汙(wu)染(ran)後(hou)，部分(fen)敏感細(xi)胞可(ke)見(jian)細胞生(sheng)長(chang)增(zeng)殖變慢(man)，部分(fen)細胞變圓，從瓶(ping)壁(bi)脫落。但多數細(xi)胞汙染(ran)後(hou)無(wu)明顯變(bian)化，或略有(you)變(bian)化，若(ruo)不(bu)及時處理(li)，還(hai)會產(chan)生(sheng)交(jiao)叉(cha)汙染(ran)。 

    4.病毒(du)汙染(ran) 

    組(zu)織細(xi)胞培養(yang)過(guo)程(cheng)中(zhong)，如果(guo)沒(mei)有(you)除(chu)去(qu)潛(qian)在的(de)病毒(du)，就會產(chan)生(sheng)病毒(du)汙染(ran)。目(mu)前，從原(yuan)代(dai)猴(hou)腎細(xi)胞的培(pei)養中(zhong)已(yi)發(fa)現(xian)不(bu)少(shao)於20種(zhong)血(xue)清(qing)性病毒(du)。 

    盡管(guan)病毒(du)汙染(ran)的(de)細(xi)胞不(bu)影(ying)響(xiang)原(yuan)代(dai)培(pei)養(yang)，但(dan)生(sheng)產(chan)疫(yi)苗(miao)是不(bu)安全(quan)的。因此(ci)，潛(qian)在病毒(du)是細(xi)胞大量(liang)生(sheng)產(chan)和(he)疫(yi)苗(miao)、幹擾(rao)素(su)等(deng)生(sheng)物制品(pin)制作中(zhong)的難(nan)題。